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荧光共振能量转移

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荧光共振能量转移,两个分别接近染料分子(或发色团之间)在激发能量电磁波不向电子共振现象可以通过直接移动。因此,一个分子(供体)吸收的能被转移到另一分子(受体),并且当受体是荧光分子时,荧光会从受体发出。

供体的发射光谱和受体的吸收光谱之间的重叠积分越大,则福斯特距离越大,能量转移越容易发生。作为FRET的观察手段之一,有一种方法,其中用对应于供体吸收光谱的光激发供体,并检测从受体发出的荧光强度的增加。另外,存在一种测量供体的荧光强度和荧光寿命的变化的方法。

荧光共振能量转移

FRET效率随着距离的增加而迅速降低,这是两个分子之间距离的六次方的函数。通过应用此方法,可以根据FRET效率计算两个分子之间的距离。但是,由于FRET效率也受到两个分子的电偶极子的取向的影响,因此,与荧光蛋白质同样,如果在荧光寿命时间顺序中不发生各向同性的荧光发光,则可以进行正确的距离计算。

应用程序

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化学上,当两个分子通过共价键变成单个分子或形成超分子复合物时,观察到FRET。有使用此的光气感测试剂等。

它也用于检测蛋白质与蛋白质的相互作用,特别是在分子生物学生物物理学中。例如,如果用不同的荧光蛋白(用GFP,YFP等改良的CFP)标记两种目标蛋白,则可以通过它们的相互作用(结合)观察到FRET。(由于相互作用而引起的分子排列的变化会随着颜色的变化而出现。)它也适用于实时PCR。

在此类生物学应用中,由于变色或与其他荧光物质(自发荧光)的干扰,可能难以观察到FRET。作为一种方法,以避免这种情况,荧光光致发光不)化学发光通过应用相同的原理,生物发光共振能量转移。

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