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电泳法

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电泳法,是带电粒子或分子是电场以移动介质(电场)的现象。或者,使用该现象的分析方法。特别是在分子生物学和生物化学中,它是分离DNA和蛋白质的必不可少的技术。

电泳法原理

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带电粒子和分子向其电荷的相反极移动。如果在转移过程中存在pH梯度,它将在电荷变为0的(等电点)处停止。这是等电聚焦,用于蛋白质分析。

电泳法

当使用载体时,“ 分子筛分效应”起作用,其中诸如DNA或蛋白质的聚合物被载体分子封闭,并且随着分子量增加而变得移动性降低。换句话说,具有低分子量的分子可以顺利地通过凝胶的网络,并且具有高分子量的分子可以容易地被凝胶的网络捕获并且几乎不移动。特别地,经常使用诸如琼脂糖和聚丙烯酰胺的凝胶,因为这种效果是显着的。由于核酸均匀带负电荷,因此可以通过沿特定方向(从阴极到阳极)迁移而容易地通过分子量分离它们。但是,与DNA不同,RNA在单链分子中形成高阶结构,无法确定分子量,因此在凝胶中混入变性剂(尿素,甲酰胺)。结果,RNA不形成高阶结构,因此可以分析分子量。顺便说一句,当指定核酸的分子量时,包含数十种已知分子量的核酸的标记物,称为分子量阶梯(阶梯状)标记物,在电泳过程中一起流经另一条泳道,其迁移率和样品通过比较样品的迁移率来指定样品的分子量。还存在基于另一原理的用于分离大分子量DNA的脉冲场电泳

尽管蛋白质的电荷根据类型而变化很大,但是在阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)的存在下,蛋白质分子会向阳极移动,因为SDS分子附着在蛋白质分子上。该方法是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(缩写为SDS-PAGE),并且可以如在核酸的情况下那样基于分子量进行分离。

在使用载体的电泳中,可以通过各种染色方法来检测核酸和蛋白质的位置。例如,经常使用通过荧光染料(例如溴化乙锭)检测核酸,通过染料(例如考马斯亮蓝)或银染色检测蛋白质。

直流电用于电泳。由于一般的电源交流电,因此使用AC-DC转换器(或整流器)将电流转换为直流电,然后使电流流动。

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